试管婴儿的操作步骤是什么样的,试管婴儿在操作程序上又有什么样的要求及注意事项?本文从女性控制排卵、卵泡监测、卵子培养、体外受精、胚胎移植及移植后注意事项等9个方面详细解读试管婴儿手术的操作步骤。下面让我们一起来了解试管婴儿操作的全过程吧。

1、控制性超排卵

由于自然月经周期的长短因人而异,同一患者在不同周期也存在差异。所以不易安排取卵时间,而且自然周期中只有一个优势卵泡可以发育,受精后只能形成一个胚胎,而移植一个胚胎的妊娠率是很低的。所以需要采用控制性超排卵来增强与改善卵巢功能,以达到不受自然周期的限制、获得多个健康卵子的目的,提供多个胚胎移植,并尽可能使黄体发育与子宫内膜功能同步。

控制性超排卵:一般是先用促激素使体内FSH和LH降调,再施与激素排卵药物,刺激卵巢中的卵泡成长,依据患者对药物的反应性调整药物使用剂量,患者的年龄及药物的使用剂量不同,所获得的卵子数亦不同。目前促超排卵主要有4种方案:

克罗米芬—人绝经后促性腺激素(HMG)—绒毛膜促性腺激素(HCG);

HMG—HCG;

促卵泡激素(FSH)—HCG;

促性腺激素释放激素(GnRH)—HMG—HCG;

常规使用的是克罗米芬—HMG—HCG方案。

2、监测卵泡

为评价卵巢刺激效果与决定取卵时间,须利用阴道B超来监测卵泡大小及卵泡成熟额进程,并配合抽血检查E2值 (雌激素),调整用药量。当2~3个以上的卵泡直径大于1.8cm,且1.4cm以上的卵泡数与E2值相当,便可注射人绒毛促性腺激素(hCG),促使卵泡成熟。在注射hCG后34~36小时取卵。

自然月经周期中进行排卵前监测:世界上首例试管婴儿成功就是用自然周期监测排卵期排卵的。通过基础体温测定、内分泌测定(血雌二醇值、尿中黄体生成素值)和B超的监测,配合临床观察(宫颈粘液变化等)确定取卵时日。

3、取卵及卵子培养

女性采卵时间确定后,需进行采卵手术,一般常用的采卵途径有:(1)剖腹直视下穿刺卵泡取卵;(2)经腹腔镜取卵;(3)B超引导下经腹壁、尿道膀胱或阴道穿刺取卵。目前多采用经腹腔镜或B超指引下经阴道取卵,后者尤为方便。

B超指引下经阴道取卵法:在局部麻醉条件下,经阴道B超引导,将取卵针穿过女性阴道穹窿,直达卵巢吸取卵子,并立即在显微镜下将卵子移到含胚胎培养液(含卵泡液)的培养皿中,置37 °C的培养箱中培养。培养时间取决于所取卵泡的成熟度,成熟者一般培养2~6小时。

4、取精

精子取出的时间与取卵的日子应为同一天。取精前男性须洗净双手,用手淫法留取精液。取精所给的小杯是无菌的,取精一定时不要触摸杯缘及杯内。取出的精液将采用上游法或Percoll密度梯度离心法处理。

5、体外受精及胚胎体外培养

取卵后4~5小时左右时间内,将用洗涤法处理的获取体外能量的精子与卵子放在同一个培养皿中,共同培养15~24小时后,可在解剖显微镜下检查,如看到有两个原核存在于卵母细胞原浆中表示已授精,再继续培养36~42小时。当镜下观察到受精卵已分裂至4~8个细胞时,可考虑作胚胎移植。若精子质量太差,则无法自然受精,将必须以显微注射法强迫受精 (参考卵细胞浆内单精子显微授精)。

6、胚胎移植

受精卵在体外培养48~72小时可发育到8~16细胞期胚胎。此时依据患者的年龄、曾经怀孕与否及胚胎的质量,决定移植胚胎的数目,多余的胚胎可冷冻保存。胚胎移植一般不需要进行麻醉。

目前胚胎移植多在受精后2~3天进行。一般推迟胚胎移植的时间,则对体外培养的条件要求就越高。但是推迟移植时间更符合妊娠生理,同时也可通过自然筛选淘汰劣质胚胎,可提高妊娠率,降低多胎率。

胚胎移植流程:手术时须将阴道及宫颈先用生理盐水清洁再用培养液擦洗,将金属或塑料导管置入颈管内。医生在显微镜下用1.3mm的聚四氟乙烯管从培养液内吸出胚胎细胞加吸0.03~0.05ml 培养液或0.03~0.05ml受试者血清,然后将此管插入宫颈管导管内放至距宫底0.5cm处,送胚胎入宫腔。

7、胚胎移植后补充黄体酮

胚胎移植后需卧床24小时,限制活动3~4天,同时接受黄体酮治疗。目前我们多采用注射法给予黄体酮支持黄体。

8、胚胎移植后第14天验晨尿确定是否妊娠

胚胎移植后14天需进行β-GCG测定,可由验尿或抽血确定是否妊娠。如果确定妊娠,则改用hCG继续补充到怀孕10周。如无妊娠情况,停用黄体酮。移植成功的妊娠属高危妊娠予以监护。

9、妊娠后14天,B超检查胎儿数及胚胎着床部位